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    microRNA
    基因突
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RNAi的分子机制


RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段,加入的小分子 RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明,一个称为Dicer的酶,是RNase III家族中特异识别双链RNA的一员,它能以一种ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因、病毒感染等各种方式引入的双链RNA,切割将RNA降解为19-21bp的双链RNAs(siRNAs),每个片段的3’端都有2个碱基突出。

RNAi效应阶段,siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex, RISC)。激活RISC需要一个ATP依赖的将小分子RNA解双链的过程。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上,并在距离siRNA3’端12个碱基的位置切割mRNA。尽管切割的确切机制尚不明了,但每个RISC都包含一个siRNA和一个不同于DicerRNA酶。

另外,还有研究证明含有启动子区的dsRNA在植物体内同样被切割成21-23nt长的片段,这种dsRNA可使内源相应的DNA序列甲基化,从而使启动子失去功能,使其下游基因沉默。



1. siRNA 合成

RNAi 效应阶段,siRNA 双链结合一个核酶复合物从而形成所谓 RNA 诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex, RISC)。激活的 RISC 通过碱基配对定位到同源 mRNA 转录本上,并在距离 siRNA3’端 12 个碱基的位置切割 mRNA。化学合成的 siRNA 具有操作简便、转染效率高、对细胞的或者组织的毒副作用小、可大规模制备等优点,特别适用于基因靶位点不确定情况下,进行 siRNA 有效片段的筛选。 



2. miRNA

MicroRNAsmiRNAs)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约20~25个核苷酸。成熟的miRNAs是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的,随后组装进RNA诱导的沉默复合体(RISC),通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA,并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者抑制靶mRNA的翻译。最近的研究表明miRNA参与各种各样的调节途径,包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。

miRNA通过与mRNA3‘端非编码区特定位点(其第2~8个核苷酸)绑定来行使功能。当与mRNA完全互补时,会引发mRNA降解;当与mRNA不完全配对时,会引发转录后的基因沉默(抑制靶基因的表达),从而抑制或阻止相应的mRNA翻译过程。


赛伯生命科学可为用户提供专业的RNA合成定制服务,生产规模能够满足OD级到毫克级的核酸生产。除普通RNA的常规合成外,还提供针对不同位点的核酸化学修饰,包括Cy3Cy5FAM、胆固醇、生物素、磷酸基团,2’位氟代、2’位氟代甲氧基,磷酸骨架的硫代修饰等多种化学修饰与标记。



常规RNA oligos化学合成


化学修饰与标记

荧光标记的RNA oligos相对于未标记的RNA具有转染情况可视的优点,通过流式细胞仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等可以观察到荧光标记的RNA方便优化转染条件、胞内定位等。化学修饰的RNA oligos2’-OMe修饰、2’-F修饰、磷酸骨架硫代修饰等)解决了在转染实验中的稳定性问题,尽可能的一次性获得最佳数据。




siRNA套餐

客户提供基因序列、Gene ID或者Accession Number,我们免费设计、选择合适的位点,保证至少一对可以有效的抑制相应基因的表达,抑制效率在70 %以上 (转染效率至少达90 %)。若未筛选出有效的siRNA片段,本公司为您免费再次设计和合成一次。



mimicsinhibitor

miRNA mimic 是运用化学方法合成的miRNA 模拟物,能模拟细胞中成熟miRNA 的高水平表达,以增强内源miRNA 的调控作用,用于功能获得性(gain-of-function)研究。


miRNA inhibitor是化学合成经特殊修饰的miRNA 抑制剂,通过特异性结合成熟miRNA 分子而抑制其作用,从而降低细胞中miRNA所致的调控作用。



AgomirAntagomir

Agomir是经过特殊标记和化学修饰的双链小RNA,通过模拟内源性的miRNA来调节靶基因的生物学功能;Antagomir是根据microRNA成熟体序设计,经过特殊标记与化学修饰的单链小RNA是专门用于抑制内源性microRNA的高效阻断剂。与普通miRNA inhibitormimic相比,antagomir agomir与细胞膜亲和力更高,细胞转染实验转染试剂用量显著减少。

Agomir在反义链进行修饰,3’端进行胆固醇修饰,5’端两个硫代骨架修饰,3’端两个硫代骨架修饰全链甲氧基修饰;Antagomir 3’端进行胆固醇修饰,5’端两个硫代骨架修饰,3’端两个硫代骨架修饰,全链甲氧基修饰。